Nghiên cứu của nhóm nhà khoa học thuộc Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Huế đã chứng minh ý nghĩa và tiềm năng ứng dụng của enzyme 42 kDa chitinase trong sản xuất nông nghiệp và bảo quản sau thu hoạch. Chitinase được phân lập từ Trichoderma asperellum SH16 và sản xuất trong Nicotiana benthamiana bằng phương pháp polyethylene glycol (PEG)/salt aqueous two-phase system (ATPS). Hoạt tính cụ thể của chitinase thô và chitinase được tinh lọc một phần từ N. benthamiana lần lượt là khoảng 251 đơn vị/mg và 386 đơn vị/mg. Các hệ thống 300 g/L PEG 6000 + 200 g/L potassium phosphate (PP) và 300 g/L PEG 6000 + 150 g/L sodium phosphate (SP) đã cho thấy hiệu suất phân chia cao nhất cho mỗi loại muối trong quá trình chiết xuất sơ bộ. Tuy nhiên, trong hai loại muối, PP đã thể hiện hiệu suất cao hơn SP, với hệ số phân chia K là 4,85 so với 3,89, tỷ lệ thể tích V là 2,94 so với 2,68, và hiệu suất phân chia Y khoảng 95% so với 83%. Sau khi chiết xuất ngược, hoạt tính enzym của chitinase tinh lọc có thể đạt tới 834 đơn vị/mg (PP) và 492 đơn vị/mg (SP). Các yếu tố tinh lọc đã đạt 3,32 (PP) và 1,96 (SP), với hiệu suất thu hồi khoảng 59% và 61%. Phân tích SDS-PAGE và zymogram cho thấy chitinase tái tổ hợp đã được tinh lọc đáng kể bằng cách sử dụng ATPS. Enzyme tinh lọc đã thể hiện hoạt tính chitinolytic cao, với đường kính vùng thủy phân khoảng 2,5 cm-3 cm. Nó cũng giảm đáng kể sự phát triển của Sclerotium rolfsii; đường kính khuẩn lạc sau khi điều trị với 60 đơn vị enzym cho 104 spores chỉ khoảng 1 cm, so với 3,5 cm trong nhóm đối chứng. Hiệu ứng kháng nấm của chitinase gợi ý rằng enzym này có tiềm năng ứng dụng lớn trong sản xuất nông nghiệp cũng như bảo quản trái cây và rau quả sau thu hoạch.
Nguồn tham khảo: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/38688335/